Анализ для обнаружения внутриклеточных гранул

Анализы бесконтактного лигирования (PLA), проведенные с помощью Hermes WiScan для выявления белок-белковых взаимодействий

Источник:
Фосфатаза кофилина slingshot homolog 1 (SSH1) связывает сигнализацию NOD1 с ремоделированием актина

Bielig H et al., PLoS Pathog. 2014 Sep 4;10(9):e1004351. doi: 10.1371/journal.ppat.1004351. eCollection 2014 Sep.

Группа пользователей системы визуализации Hermes из Штутгартского университета использовала многоуровневый, высокопроизводительный, лекарственный, геномный подход к скринингу siRNA для обнаружения новых компонентов, специфичных для пути NOD1 и его взаимодействия с актином. NOD1 — это внутриклеточный рецептор для распознавания патогенов, который участвует во врожденных антибактериальных иммунных реакциях, адаптивном иммунитете и тканевом гомеостазе. NOD1-индуцированная сигнализация зависит от ремоделирования актина. Используя приложение Athena для изучения внутриклеточных гранул, они определили, что белок SSH1 опосредует взаимодействие между актином и NOD1. Результаты исследования были опубликованы в журнале PLOS Pathogens.

Рисунок: Анализы лигирования in situ (PLA), проведенные с помощью Hermes WiScan для выявления белок-белковых взаимодействий с помощью анализа изображений. Обнаружение взаимодействия между GFP-SSH1 (показан зеленым цветом) и Flag-NOD1 в транзиторно трансфицированных клетках HeLa. Белково-белковые взаимодействия визуализируются в виде небольших отчетливых красных пятен (сигналы PLA). Количественная оценка с помощью программы Athena (программное обеспечение для автоматического анализа WiSoft) показала, что площадь, покрытая пятнами PLA на клетку, была в 4 раза выше в клетках, экспрессирующих GFP-SSH1 и Flag-NOD1, чем в соседних GFP-отрицательных клетках.